エクソソーム蛋白質の分析　回収法と留意点

一方、抗体補足法はエクソソーム表面マーカー蛋白質に対する特異抗体を結合させ、ピペットチップやカラム内に充填したデバイスを利用してエクソソームを単離する方法です。このため自動化への適用があ容易であることが特徴であり、比較的短時間で試料中のエクソソームを効率的に回収可能です。
ここで留意すべき点は、尿中に共存する多量の蛋白質の影響です。エクソソームに内包される蛋白質を分析するためには、エクソソームの回収過程においてアルブミンやトランスフェリンのほか、健常人尿に多量に排泄される尿細管性蛋白質であるTHP（Tamm-Horsfall protein）などのコンタミネーションを避けなければなりません。特にTHPは、エクソソームを巻き込んで沈殿してしまうため注意が必要です。これに対しては、尿試料にDTT（dithiothreitol）を加えて凝集したTHPの構造を破壊してエクソソームを放出させる方法が報告されており、またエクソソームの精製処理の工程を37℃で行うとTHPの凝集が抑制され、エクソソーム内の蛋白質を最も高率よく得られたとの報告もあります。このほかに、腎糸球体障害が重度の場合、血液中のエクソソームが混入する可能性があり、血液由来のエクソソームとの鑑別も必要となります。